實(shí)驗室離心機離心方法介紹

更新時(shí)間：2024-03-08

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實(shí)驗室離心機分離方法不一，適用場(chǎng)合也不盡相同。目前最主流的離心分離方法主要是差速離心法和區帶離心法，其實(shí)在實(shí)驗室離心技術(shù)制備超離心法一文中有提及兩種離心方法，今天筆者對這兩種方法的原理及應用介紹進(jìn)行補充和完善。

　　1. 差速離心法：許多具有生物活性的生物大分子和亞細胞器是不穩定的，需要低溫高速離心，常用的是差速離心法。通過(guò)離心后倒出上清液和沉淀分開(kāi)，把分離出來(lái)的上清液再增大轉速離心，分離出第二部分沉淀，這樣不斷增大轉速，逐級分離出所需要的物質(zhì)。利用這種方法可以有效地分離大小上差別較大的顆粒，但不能分離大小相似的顆粒，而且所分離出來(lái)的組分往往是不均一的，雜有其他種類(lèi)的顆粒。

　　2.區帶離心法：其中又可以分為兩種：速率區帶離心和等密度速率區帶離心。

　　1) 速率區帶離心法：這是將小量懸液放在一平緩的密度梯度液上，用此梯度液來(lái)穩定顆粒的沉降。由于離心，顆粒離開(kāi)起始區帶而移動(dòng)，移動(dòng)的速度是由顆粒的大小、形狀和它們所受實(shí)驗室離心機的離心力來(lái)決定的。離心一段時(shí)間歷，各種穎粒將按照它們的相對速度移動(dòng)而各個(gè)分開(kāi)，成為一系列區帶。用這種方法我們可以將沉降速度差為20%或者更大的顆粒。

　　2)等密度區帶離心法：這是將要分離的顆粒懸液放至密度梯度液上，或者實(shí)際上將顆粒溶于制作梯度的溶液中。通過(guò)離心，顆?；蛘呱细』蛘呦鲁?，達到與它們自己密度相同的液體處在這里它們沒(méi)有重量，不管離心多長(cháng)時(shí)間，它們再也不移動(dòng)了。這些顆?？沙蔀橐幌盗袇^帶，每種顆粒在它自己的密度區。所以，這是一種利用顆粒浮密度的大小分離顆粒大小的方法。使用的介質(zhì)通常是氯化銫(Cscl)和硫酸銫(Cs2SO4)。前者適合于DNA分離，后者適合于RNA分離。這種方法與速率區帶離心法相比，它有一個(gè)主要的缺點(diǎn)是在離心期間，顆粒不可避免地暴露在高濃度的梯度溶液中，會(huì )引起顆粒的部分損傷，并可能出現相當于損傷顆粒的一些額外的區帶。

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